豬肺炎支原體抗原(MP-Ag)ELISA試劑盒 定性常見樣本處理及要求：

【血清樣本】：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘組合運用，取上清即可更讓我明白了，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融積極。

注意事項(xiàng)：收集血液樣本應(yīng)避免溶血探索，因?yàn)榧t細(xì)胞在溶解時(shí)會(huì)釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，這種情況下集聚，ELISA實(shí)驗(yàn)中將會(huì)出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng)競爭力，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確，出現(xiàn)假陽性結(jié)果哪些領域。另外敢於挑戰，樣本還應(yīng)避免細(xì)菌污染不斷創新，因?yàn)榧?xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確提供了遵循。

【血漿樣本】：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本參與水平，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)服務效率，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存明確相關要求，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：檢測(cè)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說明書統籌發展，查看該試劑盒針對(duì)抗凝劑是否有特殊要求深化涉外。

【細(xì)胞培養(yǎng)物上清】：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)生產製造，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存開展試點，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

【樣品保存】：樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃共同，若不能及時(shí)檢測(cè)推進一步，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)）簡單化，或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)）力度，避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果系統性，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)勇探新路。

檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被肺炎支原體（MP）抗體的包被微孔中便利性，依次加入標(biāo)本方法、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并洗滌提供有力支撐。用底物TMB顯色切實把製度，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色自行開發。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）進行部署，與CUT OFF值相比較，從而判定標(biāo)本中肺炎支原體抗原（MP-Ag）的存在與否應用情況。

豬肺炎支原體抗原(MP-Ag)ELISA試劑盒 定性組成及其配置：

操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條示範，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置陰有很大提升空間、陽性對(duì)照孔和樣本孔運行好，陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照可能性更大、陽性對(duì)照各50μL部署安排；

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL搖籃，再加稀釋液40μL；

4.  隨后陰推廣開來、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL推動，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min資源配置。

5.  棄去液體信息，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液大力發展，靜置1min豐富內涵，甩去洗滌液，吸水紙上拍干不同需求，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）發展。

6.  每孔加入底物A、B各50μL總之，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL支撐作用，15min內(nèi)研學體驗，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

ELISA試劑盒常見問題解答：

1. 問：96T可以檢測(cè)多少個(gè)樣本最為突出？48T可以檢測(cè)多少個(gè)樣本落實落細？

上海軒澤康生物解答：96T ELISA試劑盒可檢測(cè)90個(gè)樣本，留6個(gè)孔做標(biāo)準(zhǔn)曲線高效化；48T ELISA試劑盒可檢測(cè)42個(gè)樣本製高點項目。

2. 問：能否使用自己的稀釋液或者緩沖液？

上海軒澤康生物解答：每個(gè)試劑盒中都含有按配方配置的與特異性樣品種屬相配套的稀釋液範圍和領域，以確保待檢測(cè)的樣品被正確稀釋有所增加。具體請(qǐng)參看說明書

3. 問：ELISA檢測(cè)試劑盒空白對(duì)照是什么意思？

上海軒澤康生物答：不加樣本特征更加明顯，不加稀釋液估算，不加酶標(biāo)試劑。其他都可以加的可能性。

4. 問：我是按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行測(cè)定的但是沒有任何信號(hào)不要畏懼，這是為什么？

上海軒澤康生物答： 對(duì)于使用HRP底物的比色測(cè)定問題，終止液的加入會(huì)使底物變色逐漸顯現。而說明書推薦的波長(zhǎng)就是最適波長(zhǎng)。通過輕拍酶標(biāo)板的邊緣充分混合孔內(nèi)試劑系統穩定性，加入終止液時(shí)顏色由藍(lán)變黃拓展基地。如果加終止液之前孔內(nèi)試劑沒有混合集中展示，則底物顏色變綠。也可能加入試劑的順序錯(cuò)誤不合理波動。加入底物溶液以后不要清洗酶標(biāo)板宣講手段，在連續(xù)稀釋時(shí)確定已經(jīng)加入標(biāo)準(zhǔn)品。如果底物系統(tǒng)中有兩個(gè)成份必須混合均勻積極拓展新的領域。同時(shí)需確保酶標(biāo)儀的使用和操作正確配套設備。確定試劑、標(biāo)準(zhǔn)品相對開放、樣品都正確配置并按照說明滴加無誤推進高水平。

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